HPLC法測定瀉痢消膠囊中芍藥苷含量分析

　　摘　要：目的 建立瀉痢消膠囊中芍藥苷的含量測定方法。方法 色譜柱：Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液(25:75);檢測波長：230 nm;流速：1.0 mL·min-1。結(jié)果 芍藥苷在0.484 4～2.422 0 μg(r=0.999 9)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程分別為Y = 190 9276.923 1X – 4 265.72(r = 0.999 9)，平均加樣回收率分別為99.67%(RSD=2.13%)。結(jié)論 所建立的方法準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，可用于瀉痢消膠囊中芍藥苷的質(zhì)量控制。

　　關(guān)鍵詞：瀉痢消膠囊;芍藥苷;HPLC

　　瀉痢消膠囊是由酒黃連、酒白芍、檳榔、澤瀉、甘草等十二味中藥加工制備而成，具有清熱燥濕，行氣止痛之功效[1]，在臨床上常用于大腸濕熱所致的腹痛泄瀉，大便不暢，下痢膿血等癥，效果顯著。原標(biāo)準(zhǔn)中只對(duì)制劑中的黃連小檗堿成分進(jìn)行了含量測定，而白芍養(yǎng)血斂陰，緩急和里，為方中要藥，目前認(rèn)為芍藥苷為白芍的有效成分，因此，本研究對(duì)制劑中的芍藥苷進(jìn)行了含量測定，為完善瀉痢消膠囊質(zhì)量控制提供一定參考。

　　1 儀器與試藥

　　1.1 儀器 Agilent1100高效液相色譜儀;UV1100型紫外分光光度計(jì)(上海天美科學(xué)儀器有限公司);KQ-250型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);AB135-S電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司);

　　1.2 試藥 芍藥苷對(duì)照品(110736-200424)均購自中國藥品生物制品檢定所;瀉痢消膠囊(云南白藥集團(tuán)股份有限公司)購自青島國風(fēng)藥店;甲醇、磷酸為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

　　2 方法與結(jié)果

　　2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸(25︰75);檢測波長：230 nm;流速：1.0 mL·min-1。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

　　2.2 溶液的配制

　　2.2.1對(duì)照品溶液 取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并制成每1 mL含120μg的溶液，即得。

　　2.2.2 供試品溶液 取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理(功率300 W，頻率50 kHz)30 分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過、即得。

　　2.2.3 陰性對(duì)照溶液 取白芍以外的其余藥味，制得不含白芍的空白制劑，照供試品溶液的制備方法制備，即得。

　　2.3 方法學(xué)考察

　　2.3.1 專屬性試驗(yàn) 精密吸取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10 μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果供試品中芍藥苷色譜峰能達(dá)到基線分離，且保留時(shí)間與相應(yīng)對(duì)照品一致;陰性對(duì)照溶液在相同保留時(shí)間處無吸收峰，表明其余藥味對(duì)芍藥苷的測定無干擾，結(jié)果見圖1。

　　圖1 芍藥苷對(duì)照品(A)、供試品(B)、陰性對(duì)照(C)HPLC圖

　　2.3.2 線性關(guān)系考察 取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含242.2μg的溶液，精密量取2、4、6、8、10ml，分別置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定。以芍藥苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，對(duì)應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y = 190 9276.923 1X – 4 265.72，r = 0.999 9。結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量分別在0.484 4～2.422 0μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

　　2.3.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取2.2.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，重復(fù)測定6次，進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果芍藥苷面積的RSD分別為1.41%(n=6)，表明儀器精密度良好。

　　2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取上述供試品溶液分別于配制后的1、3、5、7、9、12 h測定芍藥苷峰面積，進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD分別為0.96%(n=6)、，表明供試品溶液在12h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

　　2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次瀉痢消膠囊(批號(hào)20101004)內(nèi)容物，共6份，分別按2.2.2項(xiàng)下方法制得供試品溶液，照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果制劑中芍藥苷平均含量分別為12.358 3 mg/g，RSD為1.69%(n=6)，表明本含量測定方法重現(xiàn)性較理想。

　　2.3.6 加樣回收試驗(yàn) 取已知含量的瀉痢消膠囊(批號(hào)20100401，芍藥苷含量12.358 3 mg/g)內(nèi)容物，共6份，各約0.25g，精密稱定，分別精密加入芍藥苷對(duì)照品溶液(0.1205 mg/mL)和甲醇各25 mL，稱定重量，其余按2.2.2項(xiàng)下方法操作，制得供試品溶液，照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，進(jìn)樣量10 μL，計(jì)算加樣回收率。

　　2.4 樣品含量測定 取3批樣品按供試品溶液制備法制得供試品溶液，并按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，每批樣品測定3份。

　　3 討論

　　3.1供試品制備方法選擇 本研究對(duì)供試品制備方法進(jìn)行了篩選，甲醇液直接超聲處理，進(jìn)樣測定，雜質(zhì)干擾嚴(yán)重，芍藥苷色譜峰分離不理想，進(jìn)而采用正丁醇萃取法進(jìn)行除雜處理[2]，結(jié)果供試品溶液中中芍藥苷色譜峰分離良好。

　　3.2 流動(dòng)相的優(yōu)選 本研究參考藥典及相關(guān)文獻(xiàn)[3,4]中關(guān)于芍藥苷的含量測定方法，對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行了篩選，最終選用甲醇-磷酸(25:75)系統(tǒng)，此系統(tǒng)能有效減小芍藥苷拖尾，使色譜峰峰型良好，保留時(shí)間適中。

　　參考文獻(xiàn)：

　　[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[S].北京,化學(xué)工業(yè)出版社,2010:851.

　　[2] 王曉燕,朱寶珠,李順吉,等.RP-HPLC法測定逍遙丸中芍藥苷的含量[J].中醫(yī)研究,2008,21(5): 14-16.

　　[3] 唐富麗，秦郁文.HPLC測定逍遙合劑中芍藥苷的含量[J].齊魯藥事,2011,4:633-635.

　　[4] 祝明,胡梅素,薛冬,等.高效液相色譜法測定婦寶顆粒中芍藥甙的含量[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn);2001,2：112-114.