如何診斷水貂的偽狂犬病
如何診斷水貂的偽狂犬病
水貂偽狂犬病叫奧者氏奇病。本病的病原為皰疹病毒科、皰疹病毒屬中的成員，其臨床的主要特征為發(fā)熱、奇氧及腦脊髓炎。接下來學習啦小編就來為大家介紹一下水貂偽狂犬病的診斷方法。
據(jù)報道，1813年在美國首次發(fā)現(xiàn)本病;1902年匈牙利學者奧者氏奇作了首次報道，稱為阿氏病;1931年Shope證明此病與阿氏病為同一傳染病;1970年希臘某水貂場因本病死亡393只，死亡率為56.1%。自此以后，世界各地不斷發(fā)生，我國貂場也有本病存在。
診斷水貂的偽狂犬病：臨床癥狀
本病的潛伏期為數(shù)小時到3天。病貂臨床表現(xiàn)為食欲突然減少或不食，體溫升高40.5~41.5℃，表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，如強烈興奮、沖撞籠壁、轉圈運動，發(fā)出尖聲嘶叫，交替出現(xiàn)精神沉郁，下頜麻痹，舌伸出口外有傷，步態(tài)不穩(wěn)，出現(xiàn)嘔吐和腹瀉，從口中流出血樣液體。病的后期臥地不起，痙攣，昏迷，眼裂縮小或斜向，出現(xiàn)癥狀后1~24小時死亡。
診斷水貂的偽狂犬?。毫餍胁W
本病除感染貂外，也感染豬、牛、羊、犬、貓、北極熊、銀狐、藍狐、貉、獾等。哺乳動物和禽類及蛙人工感染也可發(fā)病。本病的主要傳染源為發(fā)病動物，病豬、帶毒豬及帶毒鼠在傳播該病中起重要作用。病豬通過呼吸道分泌物、乳汁、尿液和生殖道分泌物排出病毒，污染飼料和飲水而傳播，也可通過直接接觸而傳染。如水貂采食了病豬和帶毒豬，病鼠和帶毒鼠的肉而感染發(fā)病，此病無明顯的季節(jié)性，常因飼料中混有病死動物的肉和內臟而引起暴發(fā)流行。
診斷水貂的偽狂犬?。翰±韺W診斷
剖檢病死貂可見全身充血和出血，胃內無異常內容物，但其黏膜高度充血和出血，頭及肺水腫，扁桃體腫大。組織學變化病毒主要存在唾液腺、結膜、胸髓、心、肺也可能見到。無特征性組織學變化。
采取病貂的腦、扁桃體等，制備懸液，離心，取上清液，(www.nczfj.com)備用。①細胞培養(yǎng)。采取病料如病貂的腦、扁桃體等制成懸液，離心，取上清液接種于Vero細胞或兔原代腎細胞，在37℃ 1小時后，以維持液加足液量，繼續(xù)培養(yǎng)，18~24小時后出現(xiàn)病變，如病毒含量低可培養(yǎng)96小時出現(xiàn)病變。將細胞作蘇木紫-伊紅染色，鏡檢，可以看到嗜酸性核內包涵體。②動物接種試驗。取病死貂的腦及扁桃體，研碎后用Hanks液或磷酸鹽緩沖液(PBS)溶液制成10%懸液，離心10分鐘，取上清液作為接種材料。人工感染家兔，取上清液1~2毫升，腹側皮下接種，36~48小時，兔先舔舐接種點，然后用力嘶咬，直到掉毛、破皮、出血，4~6小時后衰竭、倒地、痙攣，呼吸困難，然后死亡。③病毒鑒定。用吸管吸培養(yǎng)物放于銅網(wǎng)上，然后加一滴負染液，再用吸紙接觸銅網(wǎng)邊緣，將多余液吸去，在室溫中干后即可在電鏡下檢查?？梢娫摬《荆渲睆綖?50~180納米，有囊膜。本病毒抵抗力較強，8℃條件下存活46天，24℃存活30天。加熱60℃，維持30分鐘，70℃維持20~30分鐘，l00℃很快殺死。
診斷水貂的偽狂犬病：血清學診斷
微量血清中和試驗(固定病毒稀釋血清法)用0.025毫升的稀釋棒對稀釋液將各種血清連續(xù)作2倍稀釋，每孔滴下0.025毫升稀釋血清。接著每孔加入0.025毫升分離的病毒原液，然后將微量滴定板在室溫下放置30分鐘，使血清中的抗體與病毒相互作用，每孔再加入0.025毫升Vero細胞懸液(或兔腎原代細胞懸液)，加完血清和病毒孔后，多加幾個孔作細胞對照(由0.025毫升稀釋液和0.025毫升細胞懸液組成)。最后每孔加入0.05毫升礦物油封孔。將平板加蓋密封，在35℃溫箱中培養(yǎng)。經(jīng)過48小時培養(yǎng)后進行觀察。陽性血清和待檢病毒孔因病毒已被中和，各孔長出細胞單層，可判為陽性;如病毒未被中和，已知陽性血清和待檢病毒孔細胞退化，產(chǎn)生病變則判為陰性。中和試驗的計算公式(中和指數(shù)=試驗組LD50÷對照組LD50)計算出血清中和價。
免疫熒光試驗。采取病貂的腦、扁桃體等病料，切成10毫米×5毫米×3毫米小塊，浸于液氮中，取出后立即用冷凍切片機切片，將薄片貼于玻片上，在室溫下吹干，用丙酮固定后，用PBS洗3次，每次3分鐘。在玻片上的標本上直接滴加用異硫氰熒光素標記的熒光抗體進行染色，使標記的抗體與相應的抗原結合，用PBS洗滌3次，用吸紙吸干，然后用磷酸甘油滴于玻片上，蓋上蓋玻片，封片，鏡檢。如在陽性標本的胞漿內出現(xiàn)黃綠色熒光顆粒，陰性標本不出現(xiàn)熒光的條件下，被檢樣品在熒光顯微鏡下見到特異免疫熒光，可判為陽性;不出現(xiàn)特異熒光為陰性。