念珠菌顯色培養(yǎng)基的臨床應(yīng)用研究

　　【摘要】 評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)室研制的顯色培養(yǎng)基對(duì)臨床念珠菌的檢驗(yàn)效果及其應(yīng)用價(jià)值。方法 用本實(shí)驗(yàn)室研制的念珠菌顯色培養(yǎng)基與沙保羅瓊脂培養(yǎng)基對(duì)93株臨床分離株進(jìn)行篩選，并比較兩種培養(yǎng)基的分離效果。對(duì)在本實(shí)驗(yàn)室研制的念珠菌顯色培養(yǎng)基和科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好的菌株進(jìn)行初步鑒別，并與API鑒定結(jié)果做比較。結(jié)果 本實(shí)驗(yàn)室研制的念珠菌顯色培養(yǎng)基的選擇性明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的沙保羅瓊脂培養(yǎng)基，特異性與科瑪嘉的結(jié)果相一致。經(jīng)API 20C AUX對(duì)可疑菌株進(jìn)行鑒定，白色念珠菌符合率為95.2%，熱帶念珠菌的為100%，光滑念珠菌的為87.5%,克柔氏念珠菌的為100%,總符合率為94.6%。結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)室研制的念珠菌顯色培養(yǎng)基具有特異性高、選擇性強(qiáng)的特點(diǎn)，能快速、簡(jiǎn)便地初步鑒別臨床常見念珠菌，適合用于臨床樣本中念珠菌的檢測(cè)。

　　【關(guān)鍵詞】 顯色培養(yǎng)基 念珠菌 臨床應(yīng)用

　　念珠菌(Candida)是臨床標(biāo)本中最常見的真菌，該菌可引起皮膚粘膜淺層或全身系統(tǒng)性感染，而且引起的感染每年都有增多的趨勢(shì)。因而對(duì)念珠菌做出快速鑒定十分重要。如今對(duì)臨床菌種鑒定的要求越來越趨向于程序簡(jiǎn)單化，甚至能用一種鑒定方法鑒定出盡可能多的菌種。而念珠菌顯色培養(yǎng)基可從臨床標(biāo)本中分離和初步鑒別出白色念珠菌(candida albicans)、克柔氏念珠菌(C.tropicalis)、光滑念珠菌(C.glabrata)和熱帶念珠菌(C.krusei)，且能夠縮短以上幾種菌的培養(yǎng)時(shí)間，同時(shí)對(duì)標(biāo)本中雜菌抑制作用上明顯優(yōu)于沙保瓊脂培養(yǎng)基[1]。為探討顯色法的實(shí)用價(jià)值，本實(shí)驗(yàn)室用研制的念珠菌顯色培養(yǎng)基對(duì)93株臨床分離株進(jìn)行測(cè)試，并與沙保羅是瓊脂培養(yǎng)基和科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基比較，并用API 20C AUX對(duì)可疑分離株進(jìn)行鑒定，為念珠菌顯色培養(yǎng)基的應(yīng)用提供借鑒。

　　1 材料和方法

　　1.1材料

　　1.1.1 樣本來源

　　93株臨床分離株來自于廣州腫瘤醫(yī)院的樣本

　　1.1.2 培養(yǎng)基及試劑

　　念珠菌顯色培養(yǎng)基 本實(shí)驗(yàn)室研制

　　科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基 法國(guó)科瑪嘉公司

　　沙保羅瓊脂培養(yǎng)基 OXOID公司

　　API 20 C AUX鑒定條、API 20 E鑒定條 法國(guó)生物梅里埃公司

　　1.2 方法

　　1.2.1 沙保羅瓊脂培養(yǎng)基、本實(shí)驗(yàn)室研制念珠菌顯色培養(yǎng)基及科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基均按說明書配制。

　　1.2.2 將分離菌株分別劃線接種到沙保羅瓊脂培養(yǎng)基和本實(shí)驗(yàn)室研制的念珠菌顯色培養(yǎng)基上，30℃培養(yǎng)48 h后觀察菌落的生長(zhǎng)情況。

　　1.2.3將在沙保羅瓊脂培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，而在本實(shí)驗(yàn)室顯色培養(yǎng)基受抑制的20株菌株進(jìn)行革蘭氏染色及用適宜的API鑒定條進(jìn)行鑒定。

　　1.2.4 將顯色培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)的念珠菌疑似樣本，挑取單菌落分別劃線接種于本實(shí)驗(yàn)室研制的和科瑪嘉的顯色培養(yǎng)基中，30℃中培養(yǎng)48 h，觀察菌落特征。

　　表1結(jié)果的判讀表

　　Table 1 Interpretation table of results

　　1.2.5 同時(shí)將顯色培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)的念珠菌稀釋成2麥?zhǔn)蠞岫鹊木鷳乙海凑誂PI 20C AUX的說明書進(jìn)行操作，30℃孵育48～72h讀取結(jié)果，用ATBCIRS軟件自動(dòng)處理編碼得出念珠菌菌名。

　　2 結(jié)果

　　2.1 顯色培養(yǎng)基的分離效果

　　沙保羅瓊脂培養(yǎng)基及本實(shí)驗(yàn)室研制的顯色培養(yǎng)基分離效果如表2所示。在沙保羅瓊脂培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，而在本實(shí)驗(yàn)室顯色培養(yǎng)基受抑制的20株菌株經(jīng)過革蘭氏染色后發(fā)現(xiàn)均為革蘭氏陰性菌桿菌，選用API 20 E對(duì)其進(jìn)行鑒定，結(jié)果如表3所示，這些菌株均為腸桿菌科的細(xì)菌，而非念珠菌，在沙保羅瓊脂培養(yǎng)基上表現(xiàn)為假陽性，而在本實(shí)驗(yàn)室研制的顯色培養(yǎng)基上得到了很好的抑制。表明顯色培養(yǎng)基的選擇性明顯優(yōu)于沙保羅瓊脂培養(yǎng)基。

　　表2 兩種培養(yǎng)基分離效果比較

　　Table 2 the separation of two media

　　表3 20株菌的API鑒定結(jié)果

　　2.2 顯色培養(yǎng)基的特異性及符合率試驗(yàn)

　　本實(shí)驗(yàn)室研制的顯色培養(yǎng)基和科瑪嘉顯色培養(yǎng)基在初步鑒別念珠菌種上的效果相同，37株菌與API鑒定的總符合率能達(dá)到94.6%。經(jīng)顯色培養(yǎng)基初步鑒別為白色念珠菌的21株菌，除1株被API鑒定為葡萄牙念珠菌外，其余20株均被鑒定為白色念珠菌，符合率為95.2%;經(jīng)顯色培養(yǎng)基初步鑒別為為光滑念珠菌的8株菌，除1株被API鑒定為挪威念珠菌外，其余7株均被鑒定為光滑念珠菌，符合率為87.5%;而熱帶念珠菌和克柔氏念珠菌在顯色培養(yǎng)基上初步鑒別的結(jié)果與API鑒定符合率均達(dá)到100%。表明顯色培養(yǎng)基對(duì)念珠菌各種的初步鑒別的特異性很高。

　　表4 三種方法結(jié)果比較

　　Table 4 The Results of three methods

　　3 討論

　　對(duì)念珠菌建立起鑒別性顯色快速檢測(cè)技術(shù), 實(shí)現(xiàn)對(duì)致病菌的快速檢測(cè), 可以大大地降低工作量、節(jié)省人力和物力, 因而在臨床疾病診斷中對(duì)提高檢測(cè)樣本效率具有十分重要的意義。目前, 國(guó)內(nèi)外已有不少應(yīng)用顯色培養(yǎng)基進(jìn)行致病菌分離的文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo) [2-4]。

　　臨床上最常見的4種念珠菌白色念珠菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌和克柔氏念珠菌占念珠菌總數(shù)的95.3%[5], 而深部真菌感染中念珠菌的比例高達(dá)87.5%～94.5%[6-7]。本實(shí)驗(yàn)室研制的顯色培養(yǎng)基鑒定的37 株念珠菌中白色念珠菌占20 株(54.1%),在念珠菌中所占比例最高，與國(guó)內(nèi)相關(guān)報(bào)道相似[8]。熱帶念珠菌6株(16.2%)、 光滑念珠菌7 株(18.9%)、克柔念珠菌2 株(5.4%)。四種念珠菌占鑒定總株數(shù)的94.6%。

　　已有文獻(xiàn)指出，沙保羅培養(yǎng)基用于念珠菌菌檢測(cè)容易造成漏檢或誤檢[9]。本次研究發(fā)現(xiàn)有20株在念珠菌顯色培養(yǎng)基受抑制的菌株在沙保羅瓊脂培養(yǎng)基上有生長(zhǎng)，經(jīng)過API鑒定都為腸桿菌科的菌株。沙保羅瓊脂培養(yǎng)基容易受到腸桿菌科的雜菌干擾造成假陽性的現(xiàn)象與黃曉燕等[10]的研究結(jié)果相符。從比較的結(jié)果可以看出，念珠菌顯色培養(yǎng)基的選擇性明顯優(yōu)于沙保羅瓊脂培養(yǎng)基。

　　念珠菌生長(zhǎng)較慢，傳統(tǒng)的鑒定方法比較繁瑣，需時(shí)較長(zhǎng)且準(zhǔn)確率不高，而采用API鑒定條等自動(dòng)或半自動(dòng)方法雖能將菌鑒定到種，但價(jià)格比較昂貴，不適合中小型醫(yī)院及檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的大量使用。而本實(shí)驗(yàn)室研制的念珠菌顯色培養(yǎng)基中含有多種酶底物，可分別與白色念珠菌、光滑念珠菌、熱帶念珠菌、克柔氏念珠菌的不同酶類作用，從而呈現(xiàn)不同的顏色反應(yīng)，達(dá)到在分離菌株的同時(shí)還可以對(duì)以上4種菌進(jìn)行初步鑒別。與科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基的比對(duì)顯示兩者的效果相當(dāng)，均優(yōu)于沙保羅瓊脂培養(yǎng)基(不能區(qū)分念珠菌的各個(gè)種)。另外，顯色培養(yǎng)基對(duì)念珠菌的初步鑒別需時(shí)約48h，而傳統(tǒng)分離鑒定方法需要3～5天出報(bào)告，因而顯色培養(yǎng)法能及時(shí)給臨床治療提供依據(jù)，對(duì)由念珠菌感染引起的疾病治療具有重要意義，同時(shí)顯色培養(yǎng)法鑒別符合率高，大幅度減少后續(xù)鑒定工作，而且該培養(yǎng)基制備簡(jiǎn)單，使用方便，價(jià)格相對(duì)便宜，適合在基層單位推廣。

　　參考文獻(xiàn)

　　[1] Odds FC. Bernaerts R CHRuadar Candida, a New differential isolation medium for presumptive identification of chinicauy important candida species. J Clin Uicrob Aug, 1994, 1923-1929

　　[2] Baumgartner, C., A. M. Freydiere, Y. Gille. Direct identification and recognition of yeast species from clinical material by using Albicans ID and CHROMagar Candida plates[J]. J. Clin. Microbiol. 1996, 34 (2): 454-456

　　[3] 盧勉飛, 吳清平, 劉云林, 等. 特異性酶反應(yīng)在食源性致病菌檢測(cè)中的應(yīng)用[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2005, 15(3): 354-356

　　[4] 盧勉飛, 蔡芷荷, 吳清平, 等. 一種副溶血性弧菌顯色培養(yǎng)基的應(yīng)用[J]. 微生物學(xué)通報(bào), 2010, 37(5): 701-7076

　　[5] 周廣, 謝宏元, 王知秋. 科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基與API鑒定念珠菌的比較分析[J].川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2004,19(1):96-97

　　[6] 李云, 朱媛媛, 李雪梅. 350株念珠菌的分離鑒定及結(jié)果分析[J]. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志, 2003,13(2):200-200

　　[7] 李峰, 郭輝, 鄭照軍. 科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].實(shí)用全科醫(yī)學(xué), 2006,4(4):476-477

　　[8] 沈潔, 吳建華, 王英, 等. 科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基快速鑒定酵母菌2485株[J]. 第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào), 2007,28(3):337-338

　　[9] 朱波, 彭宇生, 王鵬. 科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J]. 瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2009(4): 418-420

　　[10] 黃曉燕, 劉海英, 王露露. CHROMagar念珠菌顯色培養(yǎng)基細(xì)菌干擾分析[J]. 廣東醫(yī)學(xué), 2006(6): 906-907