飼養(yǎng)層細(xì)胞是什么
飼養(yǎng)層細(xì)胞的影響，主要體現(xiàn)在飼養(yǎng)層種類、絲裂霉素處理飼養(yǎng)層的時間、飼養(yǎng)層細(xì)胞的代數(shù)和飼養(yǎng)層細(xì)胞的密度等。下面是學(xué)習(xí)啦小編精心為你整理的飼養(yǎng)層細(xì)胞的介紹，一起來看看。
飼養(yǎng)層細(xì)胞的介紹
飼養(yǎng)層細(xì)胞就是指一些特定細(xì)胞(如顆粒細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、輸卵管上皮細(xì)胞等已在體外培養(yǎng)的細(xì)胞)，經(jīng)有絲分裂阻斷劑(常用絲裂霉素)處理后所得的細(xì)胞單層。一般鋪在明膠層上(也可不鋪)。飼養(yǎng)層細(xì)胞大部分可用MEF(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)。
不論ES細(xì)胞或EG細(xì)胞，原代或初期培養(yǎng)階段一般都需依賴于能分泌他們在體外存活增殖所必需的生長因子的飼養(yǎng)層細(xì)胞。不同類型的飼養(yǎng)層細(xì)胞分泌的生長因子略有不同，但都要求培養(yǎng)過程中的飼養(yǎng)層細(xì)胞不分裂不增殖而仍保持代謝活性。是細(xì)胞培養(yǎng)，尤其是胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)常用的生長增殖促進(jìn)劑和分化抑制劑。
飼養(yǎng)層細(xì)胞的影響因素
飼養(yǎng)層的影響，主要體現(xiàn)在飼養(yǎng)層種類、絲裂霉素處理飼養(yǎng)層的時間、飼養(yǎng)層細(xì)胞的代數(shù)和飼養(yǎng)層細(xì)胞的密度等。動物種類不同對飼養(yǎng)層種類的要求也不同。
飼養(yǎng)層種類
STO PMEF： 對各種動物都較適宜，，但最可靠的方法還是根據(jù)動物種類篩選最佳飼養(yǎng)層為宜。有研究表明，PMEF比STO更適合用于小鼠ES(胚胎干細(xì)胞)的培養(yǎng)。
UE(子宮上皮細(xì)胞)
BRL(大鼠肝細(xì)胞)等
動物種類
需要經(jīng)過篩選來確定最適宜該種動物ES分離克隆的飼養(yǎng)層
絲裂霉素處理滋養(yǎng)層的時間
目前絲裂霉素(常用有絲分裂阻斷劑)處理時間在小鼠成纖維細(xì)胞上一般要求為：在37攝氏度，5%二氧化碳飽和溫度的條件下處理24h，時間過短達(dá)不到預(yù)定目的，成纖維細(xì)胞不能被成功地抑制住，時間過長則使細(xì)胞老化，活性下降，分泌因子的能力降低，從而直接影響ES細(xì)胞增殖和分化的抑制。同時處理完的清洗工作也很重要，一般要求用無鈣鎂PBS沖洗4~5遍，以確保絲裂霉素的徹底清除。
飼養(yǎng)層細(xì)胞的代數(shù)及密度
以小鼠成纖維細(xì)胞為例，選3~5代，密度為10^6-10^7個/ml為宜，代數(shù)過低所含雜細(xì)胞太多，代數(shù)過高則細(xì)胞活力降低。
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