光學(xué)顯微攝影的用光方法與技巧

　　光學(xué)顯微攝影即顯微攝影電子顯微攝影而用的術(shù)語。由物鏡(倍率2-100倍)和目鏡(5-15倍)的組合，若用35毫米照相機，可在膠片上拍成5-800倍。若為六寸片，能拍出20-3000倍的照片，但光學(xué)顯微鏡倍率限度約為1200倍。若超出此限度進行擴印，無法獲得清晰的像。光學(xué)顯微攝影必須要有明亮、均勻、無反光的照明，同時要注意光源的調(diào)節(jié)和色溫的變化。 另外，由于樣品的性能差異，還要選用不同的照明方法。下面是學(xué)習(xí)啦小編為您整理的關(guān)于光學(xué)顯微攝影的用光方法與技巧，希望對您有所幫助!

　　光學(xué)顯微攝影的用光方法與技巧一、光學(xué)顯微攝影的用光

　　光學(xué)顯微攝影的照明，會對物鏡解像力產(chǎn)生明顯影響，一般要求光源的輸出能夠集中到很小面積上，光強高、熱量小，幾何尺寸不大。

　　在一般明視場照明顯微攝影時，通常采用6伏或者12伏螺口形白熾鎢絲燈泡做照明光源，色溫為2700～3200K，其亮度的調(diào)整由變壓器實現(xiàn)，這種照明盡管看上去很亮，色溫并不高，所以，應(yīng)盡量用最高電壓，使燈光亮度、色溫提高，并使用RAW格式拍攝，以便后期校正色溫。

　　但是，白熾鎢絲燈泡長期使用，其鎢絲蒸發(fā)后所產(chǎn)生的沉物會積聚在玻璃罩內(nèi)壁，這樣會降低亮度與色溫。所以，12伏100瓦的鹵素鎢絲燈光便成了光學(xué)顯微攝影的優(yōu)質(zhì)光源。(這種鹵素鎢絲燈在燈管內(nèi)充鹵素氣體，在燈絲點燃后，蒸發(fā)出來的鎢會與鹵素氣體形成鹵化鎢，附著在燈管內(nèi)壁，而關(guān)閉電源冷卻時，鹵化鎢又會分解，屆時鎢又回到燈絲上去，這樣便延長了燈泡的使用壽命 ，改善了光源照明，縮小了燈泡的幾何尺寸，提高了光源強度)。

　　用于光學(xué)顯微攝影的光源還有氙燈、鋯燈、電子閃光燈、汞蒸氣燈等，可以根據(jù)不同的目的，選用適當(dāng)?shù)墓庠础Ｈ珉療舨粌H可以發(fā)出連續(xù)的可見光，還包含長波紫外線和紅外光譜部分;汞蒸氣是優(yōu)質(zhì)的單色光源，特別適于單色黑白顯微攝影。

　　拍攝顯微照片，要求有明亮、均勻、無反光的照明條件，其照明方法可分為兩類，即透射照明和反射照明(落射光照明)

　　透射光照明是指從光源射出的光線從標(biāo)本的下面透過標(biāo)本進入物鏡。而落射照明是指光線從正面投射到標(biāo)本的正面，物鏡接受的光是從標(biāo)本反射來的光。

　　落射光照明主要用于拍攝不透明的標(biāo)本，如皮膚、小生物、植物果實表面等。拍出的像有立體感。落射光與物鏡之間的角度越小越好，現(xiàn)代顯微攝影裝置的落射光大多與物鏡合軸。 在沒有專業(yè)設(shè)備的情況下可以用斜射照明，在對應(yīng)面加反光屏，或用另一只燈做輔助光，也可以使用環(huán)形閃光燈。

　　光學(xué)顯微攝影的用光方法與技巧二、光學(xué)顯微攝影的曝光控制

　　雖然現(xiàn)在的相機均有自動測光或自動曝光功能，但是如果一個視野中亮處面積超過二分之一，則易出現(xiàn)曝光不足的現(xiàn)象，所以如果標(biāo)本主體小，又處在亮背景中，就要適當(dāng)增加曝光時間。

　　在控制曝光時，要注意以下因素：

　　1. 光源強度的影響： 由于電壓的變化，光源亮度可能產(chǎn)生5-10倍的變化。

　　2. 光源的距離及對標(biāo)本的照射面積。

　　3. 光源的波長及色溫。 光源的波長長、色溫低，色光偏紅時，曝光時間要長些。光波短，色溫高，色光偏青時，曝光時間要短些。

　　4. 電壓的波動會引起曝光量的改變，所以攝制過程中要保持電壓的相對穩(wěn)定。

　　5. 聚光器的位置經(jīng)過實驗固定后不宜改動。

　　6. 使用濾色鏡、乳白玻璃、偏振鏡等都要按其曝光指數(shù)增加曝光時間(手動曝光)。

　　7. 目鏡的放大倍率。 以×5倍的目鏡作曝光基準(zhǔn)1時，×10倍目鏡要4倍的曝光量，×15倍目鏡要增至9倍的曝光。

　　8. 物鏡的倍率和N·A值： 如果把×10倍的目鏡作為1時，×40倍目鏡要2.5倍的曝光，×100倍的物鏡要4倍的曝光。

　　9. 從目鏡出射點到感光片的距離

　　10. 標(biāo)本的染色也會對曝光產(chǎn)生影響

　　11. 標(biāo)本與目鏡間的介質(zhì)折射率大、曝光時間短，反之，曝光時間長。曝光時間與折射率成反比。

　　12.聚光鏡的光闌孔徑變化能使曝光產(chǎn)生2～20倍的變化。

　　光學(xué)顯微攝影的用光方法與技巧三、光學(xué)顯微攝影中濾色鏡的應(yīng)用

　　濾色片幾乎在拍攝什么樣的標(biāo)本都有用場。例如：

　　1. 用濾色片校正反差突出重點光學(xué)顯微攝影往往要突出重點，這就要使用適當(dāng)?shù)臑V色鏡加強反差，強調(diào)需要突出的重點結(jié)構(gòu) ，而減弱其非重點部分。使用標(biāo)本染色補色的濾色鏡可以增強標(biāo)本反差，比如蘇木精染出的色標(biāo)本中用綠濾色鏡，就可增強反差。

　　2. 兩種顏色的結(jié)構(gòu)體現(xiàn)： 如果想使標(biāo)本中兩種以上的顏色都清楚地呈現(xiàn)在畫面上，如紅、藍兩種顏色，可以采取兩次曝光的方法，先用紅濾色鏡，再用藍濾色鏡各曝一次光，就可以清楚地體現(xiàn)兩種顏色的結(jié)構(gòu) 。

　　3. 短波光濾色鏡可以提高對標(biāo)本的分辨率。 短波光濾色鏡(如UV鏡)可以分辨出在可見光下肉眼看不見的組織結(jié)構(gòu)。用紫外線濾色片配合紫外膠片可提高成像可分辨，達到560～1000線/毫米。 紫外線光源的射線很熱，采用一般濾色片容易烤焦標(biāo)本，所以要用液體濾光器，其內(nèi)裝有氯化銅或硫酸銅溶液30克/升。這不僅可以防熱、吸收紅外線尚可讓紫外線通過。