單克隆抗體技術(shù)論文

單克隆抗體技術(shù)論文

　　單克隆抗體技術(shù)是一種免疫學(xué)技術(shù)，將產(chǎn)生抗體的單個(gè)B淋巴細(xì)胞同骨髓腫瘤細(xì)胞雜交， 獲得既能產(chǎn)生抗體， 又能無(wú)限增殖的雜種細(xì)胞，并以此生產(chǎn)抗體。下面是小編精心推薦的一些單克隆抗體技術(shù)論文，希望你能有所感觸!

　　單克隆抗體技術(shù)論文篇一

　　實(shí)體瘤的單克隆抗體治療

　　【關(guān)鍵詞】 單克隆抗體

　　【摘要】 單克隆抗體是以腫瘤的特異性蛋白為靶點(diǎn)，在腫瘤 治療 中具有特異性、有效性、低毒性的特點(diǎn)。單克隆抗體治療的靶點(diǎn)包括細(xì)胞表面抗原和生長(zhǎng)因子受體等。單克隆抗體單一治療和聯(lián)合化療、放療在實(shí)體瘤治療中顯示出了很好的療效，抗體與放射性核素結(jié)合的放射免疫性治療也有明顯的療效。本文通過(guò)單抗治療機(jī)制和臨床治療試驗(yàn)兩方面介紹了幾種單克隆抗體以及抗體的治療戰(zhàn)略。

　　【關(guān)鍵詞】 單克隆抗體;實(shí)體瘤;免疫治療

　　【Abstract】 Monoclonal antibodies have emerged as an important therapeutic properties for tumor by targeting specific protEins of tumor. Those reagents have the advantage of specificity, and efficiency, low toxicity. Those targets for monoclonal antibodies therapy include cellular growth factor receptors and cell surface antigens, etc. Unconjugated antibodies show significant efficacy in the treatment of solid tumors by monotherapy and combining with chemotherapy or radiotherapy. Radioimmunotherapy is that antibodies conjugate to radionuclides shows significant efficacy, too. This review presents some of the moloclonal antibodies and Mab-guided strategies by focusing on the mechanisms and some of experiences reported for Mab evaluated in clinical trials.

　　【Key words】 monoclonal antibody;tumor;immune therapy

　　腫瘤的免疫治療和放射免疫治療開(kāi)始于20世紀(jì)50年代，早期用于治療的抗體是多克隆抗體，但因?yàn)槠洚愘|(zhì)性和藥學(xué)特性不適宜而被淘汰。1975年Kohler和MilstEIn利用雜交瘤技術(shù)成功制備出單克隆抗體，成為20世紀(jì)生物領(lǐng)域的一大技術(shù)革命。隨著單克隆抗體在制備技術(shù)和 應(yīng)用 方面的 發(fā)展 ， 目前 單克隆抗體已在生物學(xué)及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用，尤其是在腫瘤的診斷和治療方面發(fā)揮了重要作用。

　　單克隆抗體抗腫瘤的機(jī)制包括抗體依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒效應(yīng)(CDCC)或補(bǔ)體依賴(lài)性細(xì)胞毒效應(yīng)(CDC)殺死腫瘤細(xì)胞;通過(guò)抗體競(jìng)爭(zhēng)地與受體結(jié)合，干擾配體-受體的結(jié)合和相互作用， 影響 其發(fā)揮生物效應(yīng)，抑制腫瘤生長(zhǎng);和受體結(jié)合直接誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等。由于單克隆抗體大部分為鼠源性抗體，在人體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生人抗鼠抗體(HAMA),與單抗結(jié)合后降低了抗腫瘤效應(yīng)。單克隆抗體對(duì)血液腫瘤的治療取得了顯著的療效，而實(shí)體瘤治療療效不如前者。這可能和抗體分子很難通過(guò)毛細(xì)血管的內(nèi)皮層，組織穿透力差，腫瘤攝取率低以及實(shí)體瘤內(nèi)部的“高壓"狀態(tài)有關(guān)。隨著抗體技術(shù)的發(fā)展和新的靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)，近年來(lái)FDA批準(zhǔn)了數(shù)個(gè)單克隆抗體用于實(shí)體瘤臨床治療，實(shí)體瘤的免疫導(dǎo)向治療取得了飛速的發(fā)展。下面對(duì)幾種用于實(shí)體瘤治療的單克隆抗體進(jìn)行介紹。

　　1 抗CD20單克隆抗體

　　CD20抗原是分子量為35kD的非糖基化跨膜蛋白。CD20表達(dá)在前-B細(xì)胞和成熟B細(xì)胞膜上，同時(shí)有超過(guò)90%的B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)細(xì)胞也表達(dá)CD20，而漿細(xì)胞、造血干細(xì)胞及T細(xì)胞則無(wú)CD20的表達(dá)。CD20可能對(duì)Ca2+的跨膜運(yùn)輸、B淋巴細(xì)胞的分化、增殖具有調(diào)節(jié)作用。在血清中無(wú)游離CD20存在，最重要的是B淋巴細(xì)胞上的CD20很少內(nèi)化和脫落，是B淋巴細(xì)胞瘤免疫導(dǎo)向治療的理想靶點(diǎn)。

　　利托昔(Rituximab)是1997年FDA批準(zhǔn)用于治療B淋巴細(xì)胞NHL的抗CD20嵌合型單克隆抗體，是由鼠抗CD20的可變區(qū)Fab和人IgG1抗體的穩(wěn)定區(qū)Fc段構(gòu)成。Rituximab能夠有效地降低淋巴瘤患者血液循環(huán)中的B細(xì)胞數(shù)量，其機(jī)制包括：(1)CDC效應(yīng);(2)ADCC效應(yīng);(3)誘導(dǎo)瘤細(xì)胞凋亡，同時(shí)它還增加細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。在Ⅲ期臨床試驗(yàn)中對(duì)166例復(fù)發(fā)性、難治性和濾泡型NHL進(jìn)行治療觀察，每周的治療劑量為375mg/m2，經(jīng)過(guò)4周治療，有效率為48%,其中完全緩解率(CR)為6%，部分緩解率(PR)為42%。腫瘤體積縮小的患者126例，占總數(shù)的76%，平均藥效持續(xù)時(shí)間為11.6個(gè)月[1]。聯(lián)合其他的化療藥物進(jìn)行治療的Ⅱ期試驗(yàn)中，40例患者接受rituximab和CHOP方案的聯(lián)合治療6周，結(jié)果表明35例患者(其中5例患者因其他原因退出試驗(yàn))有效率為100%，其中CR為63%，PR為37%。平均藥效持續(xù)時(shí)間為39.7+個(gè)月。運(yùn)用PCR技術(shù) 分析 發(fā)現(xiàn)8例bcl-2陽(yáng)性患者經(jīng)治療后7例患者轉(zhuǎn)陰，這些治療效果是單一使用CHOP方案達(dá)不到的。目前，rituximab已在臨床廣泛運(yùn)用。

　　2 抗CD22單克隆抗體

　　CD22是一個(gè)135kD的限制性唾液酸糖蛋白，表達(dá)在生長(zhǎng)期B細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中。只有分化成熟以后的B細(xì)胞表面出現(xiàn)。在人類(lèi)，大部分循環(huán)系統(tǒng)中的免疫球蛋白IgM陽(yáng)性和IgD陽(yáng)性的B細(xì)胞在細(xì)胞表面表達(dá)CD22。CD22在濾泡型、套型和緣區(qū)型B細(xì)胞中強(qiáng)烈表達(dá)。通過(guò)免疫組化、流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)得出，在B細(xì)胞淋巴瘤中至少60%～80%的細(xì)胞表達(dá)CD22。CD22的功能尚不確定，最近的 研究 表明CD22是B細(xì)胞活化復(fù)合物的一個(gè)連接分子。在對(duì)CD22缺乏的小鼠的研究中發(fā)現(xiàn)骨髓和循環(huán)中成熟的B細(xì)胞數(shù)量減少，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)這些B細(xì)胞壽命較短，易凋亡。說(shuō)明CD22是B細(xì)胞生長(zhǎng)和成熟的關(guān)鍵因子。在與天然配體和抗體結(jié)合以后，CD22迅速內(nèi)化，給B淋巴瘤細(xì)胞提供凋亡前信號(hào)[2]。

　　LL2抗體(以前叫HPB-2)是一個(gè)IgG2a型抗CD22的鼠源單克隆抗體，體外免疫組化證實(shí)LL2抗體和51個(gè)NHL的B細(xì)胞樣本中的50個(gè)樣本抗原反應(yīng)，但不和其他的惡性非淋巴組織反應(yīng)[3]。人源化的Ig1型LL2是epratuzumab,它降低了免疫原性，延長(zhǎng)了半衰期，增強(qiáng)了功能。在單一使用epratuzumab的Ⅰ/Ⅱ臨床試驗(yàn)研究中，對(duì)55例套性NHL患者連續(xù)4周使用epratuzumab單一治療，劑量分別為120、240、360、480、600、1000mg/(m2・week)。對(duì)51例患者(其中4例患者因其他原因退出試驗(yàn))進(jìn)行評(píng)價(jià)，9例患者治療有效(OR)，有效率為18%;3例患者達(dá)到CR，占6%;6例患者達(dá)到PR，占12%;20例患者處于穩(wěn)定期，占39%;22例患者病情惡化，占43%。53%的患者腫瘤的體積有一定的減小。平均藥效持續(xù)時(shí)間為79.3周。治療有效的患者的用藥劑量分別在360mg/m2和480mg/m2兩個(gè)水平。Sharkey RM等用111In和90Y標(biāo)記epratuzumab比較治療NHL，發(fā)現(xiàn)90Y-DOTA-epratuzumab半衰期較短，對(duì)機(jī)體的損傷相對(duì)較小，是一種很有前途的放射免疫治療藥物[4]。

　　3 抗HER-2/neu抗體

　　HER-2/neu是一種原癌基因，位于人染色體17q21，編碼185kD的跨膜糖蛋白受體，具有酪氨酸激酶活性，屬于表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)家族。已發(fā)現(xiàn)20%～30%的晚期乳腺癌患者HER-2/neu過(guò)度表達(dá)和擴(kuò)增，同樣在卵巢癌、前列腺癌、肺癌、胃癌、膀胱癌中也有表達(dá)。在乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)HER-2的過(guò)表達(dá)與預(yù)后不良有關(guān)，有資料表明HER-2過(guò)表達(dá)的乳腺癌患者緩解率和生存率降低，復(fù)發(fā)率增高[5]。而且HER-2的過(guò)表達(dá)的乳腺癌具有抗藥性，研究表明這類(lèi)腫瘤對(duì)激素治療缺乏反應(yīng)，特別是tamoxifen聯(lián)合化療藥如CMF(環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶)治療時(shí)效差[6]。

　　Herceptin(Trastuzumab)是采用生物工程技術(shù)制作人源化的單克隆抗體，1998年9月FDA批準(zhǔn)上市。Herceptin能有效地抑制過(guò)表達(dá)HER-2的細(xì)胞的增生效應(yīng)，其作用機(jī)制還不完全清楚，可能包括：(1)與HER-2受體蛋白特異性結(jié)合阻斷配體與其結(jié)合而產(chǎn)生的促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，降低細(xì)胞周期S期的腫瘤細(xì)胞的比例，使大部分細(xì)胞停留在G0/G1期;(2)促進(jìn)HER-2的內(nèi)化;(3)通過(guò)抗體依賴(lài)性細(xì)胞毒作用(CDCC)殺死腫瘤細(xì)胞;(4)下調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)，抑制異常細(xì)胞DNA的修復(fù)功能，從而增加腫瘤細(xì)胞對(duì)放療和化療的敏感性[7]。

　　在Ⅱ期臨床試驗(yàn)早期單一使用Herceptin對(duì)43例HER-2陽(yáng)性的已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移乳腺癌患者進(jìn)行治療，結(jié)果總有效率為12%，其中CR 1例，PR 4例[8]。在后期的臨床試驗(yàn)對(duì)222例同樣的患者進(jìn)行的治療觀察，總有效率為15%。其中CR 8例，PR 26例，治療效果持續(xù)時(shí)間為9.1個(gè)月，其他患者中30%病情穩(wěn)定無(wú)惡化，優(yōu)于使用二線(xiàn)化療藥物治療的結(jié)果[9]。在Ⅲ期臨床試驗(yàn)中，對(duì)HER-2陽(yáng)性的轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者進(jìn)行治療，Herceptin與anthracycline聯(lián)合治療和單一用anthracycline相比有效率分別為52%、43%;聯(lián)合taxane和單一使用taxnae相比有效率分別為42%、16%。聯(lián)合治療效果優(yōu)于單一使用Herceptin治療[10]。Herceptin作為靶向藥物治療HER-2陽(yáng)性轉(zhuǎn)移性乳腺癌取得了可觀的療效。無(wú)論單用還是聯(lián)合運(yùn)用，都能產(chǎn)生理想的臨床效果。

　　4 抗CO17-1A(Ep-Cam)抗體

　　Edrecolomab是一種鼠源性Ig2a單克隆抗體，它能識(shí)別人腫瘤相關(guān)抗原CO17-1A。CO17-1A廣泛表達(dá)在多種腫瘤細(xì)胞表面，包括直腸癌、結(jié)腸癌、胰腺癌和胃癌，正常上皮組織細(xì)胞也有少量表達(dá)。Edrecolomab的作用機(jī)制包括抗體依賴(lài)細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)和抗體依賴(lài)補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCMC)。在體外試驗(yàn)研究其ADCC作用中，發(fā)現(xiàn)孵化出的加入了Edrecolomab的大腸癌細(xì)胞可以被人的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞溶解破壞。進(jìn)一步研究Edrecolomab的ADCC作用表明，干擾素-α、干擾素-β、白細(xì)胞介素-2與Edrecolomab共同孵化大腸癌細(xì)胞系HT29時(shí)明顯地增加Edrecolomab的抗腫瘤作用，而粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞-集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子、腫瘤壞死因子-α沒(méi)有這種作用[11]。Edrecolomab聯(lián)合其他非競(jìng)爭(zhēng)性的鼠源單克隆抗體孵化大腸癌細(xì)胞可以產(chǎn)生ADCMC效應(yīng)，然而單獨(dú)用Edrecolomab孵化就不會(huì)產(chǎn)生這種效應(yīng)[12]。

　　對(duì)166例經(jīng)過(guò)手術(shù)切除原發(fā)灶的Duke's C期大腸癌患者運(yùn)用Edrecolomab單一治療研究，隨訪5年發(fā)現(xiàn)和對(duì)照組相比，死亡率下降了30%; 腫瘤的復(fù)發(fā)率下降了27%; 研究還表明Edrecolomab對(duì)原發(fā)灶的大腸癌的復(fù)發(fā)率沒(méi)有影響。然而，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移作為復(fù)發(fā)的第一信號(hào)，Edrecolomab明顯降低其發(fā)生率[13]。Punt等用5-FU與Edrecolomab聯(lián)合治療試驗(yàn)表明二者聯(lián)用沒(méi)有增加藥物的毒性，但聯(lián)合用藥和單一使用5-FU相比生存率并沒(méi)有增加[14]。Della M等用Edrecolomab與capecitabine聯(lián)合治療CO17-1A陽(yáng)性的腺癌包括乳腺癌、大腸癌、胃癌、肺癌、膽囊癌等，表明二者聯(lián)合治療對(duì)進(jìn)展性和轉(zhuǎn)移性腺癌有效，毒、副作用沒(méi)有增加[15]。目前，Edrecolomab被用于結(jié)腸癌的輔助治療，在延長(zhǎng)存活期和抑制腫瘤轉(zhuǎn)移具有很好的效果。

　　5 實(shí)體瘤的放射免疫 治療 (RIT )

　　放射免疫治療是利用放射性核素和單克隆抗體結(jié)合，放射性核素對(duì)腫瘤的殺傷依靠電離輻射，再借助高特異親腫瘤的抗體為載體，不僅對(duì)與標(biāo)記抗體直接結(jié)合細(xì)胞，而且對(duì)周?chē)欢ㄉ涑虄?nèi)未結(jié)合的腫瘤細(xì)胞都有殺傷作用。由于抗體在腫瘤組織中濃度比周?chē)M織高，使放射性核素主要聚集在腫瘤組織內(nèi)，從而降低了核素對(duì)機(jī)體的毒性，提高了療效。 目前 ，放射免疫治療實(shí)體瘤顯示出了令人鼓舞的前景?？笴D20的90Y標(biāo)記的鼠源性單抗Zevalin和131I標(biāo)記的單抗Bexxar已被美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于非霍奇金淋巴瘤臨床治療并取得良好的治療效果，特別是使用化療藥物和利托昔治療無(wú)效的NHL。許多新的放療藥物正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)和評(píng)價(jià)中，預(yù)計(jì)這些藥物將相繼問(wèn)世。

　　6 小結(jié)

　　使用單克隆抗體治療惡性腫瘤是一個(gè)正在迅速 發(fā)展 的領(lǐng)域。大量 文獻(xiàn) 表明單克隆抗體在實(shí)體瘤的治療中取得了很好的療效，特別是在小的轉(zhuǎn)移灶和術(shù)后殘余瘤的治療中。隨著上世紀(jì)90年代抗體工程和噬菌體展示技術(shù)的迅速發(fā)展，基因工程抗體，如嵌合抗體、小分子抗體、雙特異性抗體和人源化抗體等相繼獲得成功。這些改造過(guò)的抗體在免疫原性、穿透性以及對(duì)各種水解酶的抵抗力等方面都優(yōu)于常規(guī)單抗。并且隨著分子生物學(xué)、免疫學(xué)的發(fā)展以及對(duì)免疫耦合物的藥 理學(xué) 的不斷探討，新型抗體將在抗原性、特異性、藥代動(dòng)力學(xué)等方面趨于完善，單抗導(dǎo)向治療實(shí)體腫瘤定會(huì)取得更大的突破。

　　【 參考 文獻(xiàn)】

　　1 Mclaughlin P, Grillo-Lopez AJ, White CA, et al.IDEC-C2B8(Rituximab)anti-CD20 monoclonal antibody therapy in patients with relapsed lowg-grade non-Hodgkin's lymphoma.Blood, 1997,90(6)：2188-2195.

　　2 Leonard John P, Coleman Morton, Ketas Jamie C, et al. Phase Ⅰ/Ⅱ Trial of Epratuzumab (Humanized Anti-CD22 Antibody) in Indolent Non-Hodgkin's Lymphoma. Journal of Clinical Oncology,2003,21(16)：3051-3059.

　　3 Pawlak-Byczkowska EJ, Hansen HJ, Dion AS, et al. Two new monoclonal antibodies, EPB-1 and EPB-2, reactive with human lymphoma. Cancer Res，1989,49:4568-4577.

　　4 Sharkey RM, Brenner A, Burton J, et al. Radioimmunotherapy of non-Hodgkin's lymphoma with 90Y-DOTA humanized anti-CD22 IgG (90Y-Epratuzumab): do tumor targeting and dosimetry predict therapeutic response? J Nucl Med, 2003, 4(12)：2000-2018.

　　5 Paik S, Hazard R, Fisher ER, et al. Pathologic findings from the National surgical Adjuvant Breast and Bowel Project: prognostic significance of erbB-2 protEin over-expression in primary breast cancer. J Clin Oncol, 1990,8:103-112.

　　6 Bezwoda WR.C-erb-B2 expression and reponse to treatment in metastatic breast cancer. Med Oncol,2000,17:22-28.

　　7 Sliwkowski MX, Lofgren JA, Lewis GD,et al. Nonclinical studies addressing the mechanism of action of trastuzumab(Herceptin). Semin Oncol, 1999,26(Suppl 12):60-70.

　　8 Baselga J, Tripathy D, Mendelsohn J, et al. PhaseⅡstudy of weekly intravenous recombinant humanized anti-p185HER2 monoclonal antibody in patients with HER2/neu- over-expressing metastatic breast cancer.J Clin Oncol,1996，14: 737-744.

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